更新时间:2021-11-13
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细胞复苏
& 把冻存管从液氮中取出来,立即投入37℃水浴锅中,轻微摇动。液体都融化后(大概1-1.5分钟),拿出来喷点酒精放到超净工作台里。
& 把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍,把粘在壁上的细胞都洗下来),1000转离心5分钟。
& 把上清液倒掉,加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动,使培养皿中的细胞均匀分布。
& 标好细胞种类和日期、培养人名字等,放到CO2培养箱中培养,细胞贴壁后换培养基。
& 3天换一次培养基。
传代方法:细胞*汇合时,倒掉旧液,加入消化液(0.25%胰蛋白酶+0.03%EDTA)2ml消化,显微镜下观察细胞*脱离瓶壁分离成单个细胞后弃掉胰酶,加培养基混匀分瓶,T25瓶中加培养基至6-8ml,T75瓶加培养基至20ml,37℃,5%CO2孵箱培养。
培养是生物学和医学研究zui常用的手段之一,可分为原代培养和传代培养两种。原代培养是直接从生物体获取细胞进行培养。由于细胞刚刚从活体组织分离出来,故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段,同时也为以后传代培养创造条件。
上海beat365手机版官方网站全程提供细胞生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、组织、冻存条件等复苏及冻存细胞株说明书信息,专业的技术支持您的细胞系实验,让您实验再无烦扰!培养的前一周内出现质量问题,客户可凭细胞的照片以及书面形式的细胞培养,实验操作过程提供给我司。经技术人员核实认定为可以予以重发的情况,由我司再免费提供一次细胞。
实验无菌技术:
& 实验进行前,无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌,以70 % ethanol 擦拭无菌操作台面,并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后,才开始实验操作。
& 每次操作只处理一株细胞株,且即使培养基相同亦不共享培养基,以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕
& 将实验物品带出工作台,以70 % ethanol 擦拭无菌操作台面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后,再进行下一个细胞株的操作。
& 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞,必要物品,例如试管架、吸管、吸取器或吸管盒等可以暂时放置,其它实验用品用完即应移出,以利于气流之流通。
& 实验用品以70 % ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在台面的中央无菌区域,勿在边缘的非无菌区域操作。
& 小心取用无菌的实验物品,避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或容器瓶口,亦不要在打开的容器正上方操作实验。
& 容器打开后,以手夹住瓶盖并握住瓶身,倾斜约45°角取用,尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
& 工作人员应注意自身的安全,须穿戴实验衣及手套后才进行实验。
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